Tankewol foar it besykjen fan Nature.com. De browserferzje dy't jo brûke hat beheinde CSS-stipe. Foar bêste resultaten riede wy oan om in nijere browser te brûken (of kompatibiliteitsmodus útskeakelje yn Internet Explorer). Yn 'e tuskentiid, om trochgeande stipe te garandearjen, sille wy de side werjaan sûnder stilen en JavaScript.
De oprjochting fan diermodellen fan modyske feroaring (MC) is in wichtige basis foar it studearjen fan MC. Fjouwerenfyftich Nij-Seelân Wite konijnen waarden ferdield yn sham-operaasjegroep, muscle-ymplantaasjegroep (ME-groep) en nucleus pulposus-ymplantaasjegroep (NPE-groep). Yn 'e NPE-groep waard de yntervertebrale disc bleatsteld troch anterolaterale lumbale sjirurgyske oanpak en in needle waard brûkt om it L5-vertebrale lichem tichtby de einplaat te punktearjen. NP waard ekstrahearre út 'e L1/2 intervertebral disc troch in spuit en ynjeksje. Boarjen fan in gat yn 'e subchondrale bonke. De sjirurgyske prosedueres en boarmetoaden yn 'e spier-ymplantaasjegroep en de sham-operaasjegroep wiene itselde as dy yn' e NP-ymplantaasjegroep. Yn de ME-groep waard in stik spier yn it gat pleatst, wylst yn de sham-operaasjegroep neat yn it gat pleatst waard. Nei de operaasje waarden MRI-scans en molekulêre biologyske testen útfierd. It sinjaal yn 'e NPE-groep feroare, mar d'r wie gjin dúdlike sinjaalferoaring yn' e sham-operaasjegroep en de ME-groep. Histologyske beoardieling liet sjen dat abnormale tissueproliferaasje waard waarnommen op 'e ymplantaasjeside, en de ekspresje fan IL-4, IL-17 en IFN-γ waard ferhege yn' e NPE-groep. Implantaasje fan NP yn 'e subchondrale bonke kin in diermodel fan MC foarmje.
Modyske wizigingen (MC) binne lesions fan 'e vertebrale endplaten en neistlizzende bonken sichtber op magnetyske resonânsjeôfbylding (MRI). Se binne frij gewoan yn yndividuen mei assosjearre symptomen1. In protte stúdzjes hawwe it belang fan MC beklamme troch syn assosjaasje mei lege rêchpine (LBP) 2,3. de Roos et al.4 en Modic et al.5 selsstannich earst trije ferskillende soarten subchondrale sinjaalabnormaliteiten yn it vertebral bonkenmerk beskreaun. Modic type I feroarings binne hypointense op T1-gewichtige (T1W) sekwinsjes en hyperintense op T2-gewichtige (T2W) sekwinsjes. Dizze lesion ûntbleatet fissure-einplaten en neistlizzend vaskulêre granulaasjeweefsel yn it bonken. Modic type II feroarings litte hege sinjaal op sawol T1W en T2W sekwinsjes. Yn dit soarte fan lesion kin endplate ferneatiging wurde fûn, likegoed as histologyske fatty ferfanging fan it neistlizzende bonken. Modic type III feroarings litte lege sinjaal yn T1W en T2W sekwinsjes. Sklerotyske lesions dy't oerienkomme mei de einplaten binne waarnommen6. MC wurdt beskôge as in patologyske sykte fan 'e rêchbonke en is nau ferbûn mei in protte degenerative sykten fan' e rêchbonke7,8,9.
Mei it each op de beskikbere gegevens hawwe ferskate stúdzjes detaillearre ynsjoch levere yn 'e etiology en patologyske meganismen fan MC. Albertje et al. suggerearre dat MC kin wurde feroarsake troch disc herniation8. Hu et al. taskreaun MC oan slimme disc degeneraasje10. Kroc stelde it konsept fan "ynterne disc-rupture", dy't stelt dat repetitive disc-trauma kin liede ta mikrotears yn 'e einplaat. Nei cleft formaasje kin endplate ferneatiging troch de nucleus pulposus (NP) in autoimmune antwurd útlizze, wat fierder liedt ta de ûntwikkeling fan MC11. Ma et al. dielde in ferlykbere werjefte en rapportearre dat NP-induzearre autoimmuniteit in wichtige rol spilet yn 'e patogenese fan MC12.
Immunsysteemsellen, benammen CD4+ T-helper-lymfozyten, spylje in krityske rol yn 'e patogenese fan autoimmuniteit13. De koartlyn ûntdutsen Th17-subset produseart it proinflammatory cytokine IL-17, befoarderet chemokine-ekspresje, en stimulearret T-sellen yn skansearre organen om IFN-γ14 te produsearjen. Th2-sellen spylje ek in unike rol yn 'e patogenese fan ymmúnreaksjes. Ekspresje fan IL-4 as in represintative Th2-sel kin liede ta slimme immunopatologyske gefolgen15.
Hoewol in protte klinyske stúdzjes binne útfierd op MC16,17,18,19,20,21,22,23,24, is d'r noch in gebrek oan gaadlike dier-eksperimintele modellen dy't it MC-proses kinne imitearje dat faak foarkomt yn minsken en kin wurde brûkt om de etiology te ûndersykjen as nije behannelingen lykas doelgerichte terapy. Oant no ta binne mar in pear diermodellen fan MC rapporteare om de ûnderlizzende patologyske meganismen te studearjen.
Op grûn fan 'e autoimmune teory foarsteld troch Albert en Ma, fêstige dizze stúdzje in ienfâldich en reprodusearjend konijn MC-model troch autotransplantearjen fan NP tichtby de boarre vertebrale einplaat. Oare doelen binne om de histologyske skaaimerken fan 'e diermodellen te observearjen en de spesifike meganismen fan NP te evaluearjen yn' e ûntwikkeling fan MC. Dêrta brûke wy techniken lykas molekulêre biology, MRI, en histologyske stúdzjes om de foarútgong fan MC te studearjen.
Twa kninen stoaren oan bloeden by operaasje, en fjouwer kninen stoaren tidens anaesthesia by MRI. De oerbleaune 48 kninen oerlibben en lieten gjin gedrachs- of neurologyske tekens nei operaasje sjen.
MRI lit sjen dat de sinjaalintensiteit fan it ynbêde weefsel yn ferskate gatten oars is. De sinjaalintensiteit fan it L5 vertebral lichem yn 'e NPE-groep feroare stadichoan op 12, 16 en 20 wiken nei ynfoegje (T1W-sekwinsje liet leech sinjaal sjen, en T2W-sekwinsje liet mingd sinjaal plus leech sinjaal sjen) (Fig. 1C), wylst de MRI-optredens sjen litte fan de oare twa groepen fan ynbêde dielen bleau relatyf stabyl yn deselde perioade (fig. 1A, B).
(A) Fertsjintwurdige sekwinsjele MRI's fan 'e knyn lumbale rêchbonke op 3 tiidpunten. Gjin sinjaal abnormaliteiten waarden fûn yn de bylden fan de sham-operaasje groep. (B) De sinjaal skaaimerken fan it vertebral lichem yn 'e ME-groep binne fergelykber mei dy yn' e sham-operaasjegroep, en gjin signifikante sinjaalferoaring wurdt yn 'e rin fan' e tiid beoardiele op 'e ynbêdeside. (C) Yn 'e NPE-groep is it lege sinjaal dúdlik sichtber yn' e T1W-sekwinsje, en it mingde sinjaal en lege sinjaal binne dúdlik sichtber yn 'e T2W-sekwinsje. Fan 'e perioade fan 12 wiken oant de perioade fan 20 wiken ferminderje de sporadyske hege sinjalen om de lege sinjalen yn' e T2W-sekwinsje.
Dúdlike bonehyperplasia kin sjoen wurde op 'e ymplantaasjeplak fan' e vertebral lichem yn 'e NPE-groep, en de bonkehyperplasia komt flugger fan 12 oant 20 wiken (Fig. 2C) yn ferliking mei de NPE-groep, gjin signifikante feroaring wurdt waarnommen yn' e modeleare vertebral bodys; Sham groep en ME groep (Fig. 2C) 2A, B).
(A) It oerflak fan it vertebral lichem by it ymplantearre diel is tige glêd, it gat genêzen goed, en der is gjin hyperplasia yn it vertebral lichem. (B) De foarm fan 'e ymplanteare side yn' e ME-groep is fergelykber mei dy yn 'e sham-operaasjegroep, en d'r is gjin dúdlike feroaring yn it uterlik fan' e ymplanteare side oer de tiid. (C) Bone hyperplasia barde op 'e ymplanteare side yn' e NPE-groep. De bonkehyperplasia ferhege rap en wreide sels út troch de intervertebrale skiif nei it kontralaterale vertebrale lichem.
Histologyske analyze jout mear detaillearre ynformaasje oer bonkenfoarming. Figuer 3 lit de foto's sjen fan 'e postoperative seksjes bekleurd mei H&E. Yn 'e sham-operaasjegroep waarden de chondrocyten goed arranzjearre en gjin selproliferaasje waard ûntdutsen (Fig. 3A). De situaasje yn 'e ME-groep wie fergelykber mei dy yn' e sham-operaasjegroep (Fig. 3B). Yn 'e NPE-groep waarden lykwols in grut oantal chondrocytes en proliferaasje fan NP-like sellen beoardiele op' e ymplantaasjeplak (fig. 3C);
(A) Trabeculae kinne sjoen wurde tichtby de einplaat, de chondrocytes binne kreas arranzjearre mei unifoarme selgrutte en foarm en gjin proliferaasje (40 kear). (B) De betingst fan 'e ymplantaasjeplak yn' e ME-groep is fergelykber mei dy fan 'e skamgroep. Trabeculae en chondrocytes kinne sjoen wurde, mar der is gjin dúdlike proliferaasje op it implantation site (40 kear). (B) It kin sjoen wurde dat chondrocytes en NP-like sellen signifikant proliferearje, en de foarm en grutte fan chondrocytes binne unjildich (40 kear).
De ekspresje fan interleukin 4 (IL-4) mRNA, interleukin 17 (IL-17) mRNA, en interferon γ (IFN-γ) mRNA waarden waarnommen yn sawol de NPE- as ME-groepen. Doe't de ekspresjenivo's fan doelgenen waarden fergelike, waarden de gen-ekspresjes fan IL-4, IL-17 en IFN-γ signifikant ferhege yn 'e NPE-groep yn ferliking mei dy fan' e ME-groep en de sham-operaasjegroep (fig. 4) (P <0,05). Yn ferliking mei de sham-operaasjegroep ferhege de ekspresjenivo's fan IL-4, IL-17, en IFN-γ yn 'e ME-groep mar in bytsje en berikten gjin statistyske feroaring (P> 0.05).
De mRNA-ekspresje fan IL-4, IL-17 en IFN-γ yn 'e NPE-groep liet in signifikant hegere trend sjen as dy yn' e skynoperaasjegroep en de ME-groep (P <0.05).
Yn tsjinstelling lieten de ekspresjenivo's yn 'e ME-groep gjin signifikant ferskil sjen (P> 0.05).
Western blot-analyse waard útfierd mei kommersjeel beskikbere antykladen tsjin IL-4 en IL-17 om it feroare mRNA-ekspresjepatroan te befestigjen. Lykas sjen litten yn figueren 5A, B, fergelike mei de ME-groep en de sham-operaasjegroep, waarden de proteïnenivo's fan IL-4 en IL-17 yn 'e NPE-groep signifikant ferhege (P <0.05). Yn ferliking mei de sham-operaasjegroep slaggen de proteïnenivo's fan IL-4 en IL-17 yn 'e ME-groep ek net statistysk signifikante feroaringen te berikken (P> 0.05).
(A) De proteinnivo's fan IL-4 en IL-17 yn 'e NPE-groep wiene signifikant heger as dy yn' e ME-groep en placebo-groep (P <0.05). (B) Western blot histogram.
Troch it beheinde oantal minsklike samples krigen tidens sjirurgy, binne dúdlike en detaillearre stúdzjes oer de patogenese fan MC wat dreech. Wy besochten in diermodel fan MC te fêstigjen om har potensjele patologyske meganismen te studearjen. Tagelyk waarden radiologyske evaluaasje, histologyske evaluaasje en molekulêre biologyske evaluaasje brûkt om de kursus fan MC te folgjen dy't troch NP-autograft feroarsake waard. As gefolch, it NP-ymplantaasjemodel resultearre yn in graduele feroaring yn sinjaalintensiteit fan 12-wiken oant 20-wiken tiidpunten (mingd leech sinjaal yn T1W-sekwinsjes en leech sinjaal yn T2W-sekwinsjes), wat oanjout fan weefselwizigingen, en de histologyske en molekulêre biologyske evaluaasjes befêstige de resultaten fan 'e radiologyske stúdzje.
De resultaten fan dit eksperimint litte sjen dat fisuele en histologyske feroaringen op 'e side fan' e vertebral lichem ynbreuk binne yn 'e NPE-groep. Tagelyk waard de ekspresje fan IL-4-, IL-17- en IFN-γ-genen, lykas IL-4, IL-17 en IFN-γ waarnommen, wat oanjout dat de ynbreuk op autologe nucleus pulposus-weefsel yn 'e vertebral It lichem kin in searje sinjaal- en morfologyske feroaringen feroarsaakje. It is maklik te finen dat de sinjaalkarakteristiken fan 'e vertebrale lichems fan it diermodel (leech sinjaal yn' e T1W-sekwinsje, mingd sinjaal en leech sinjaal yn 'e T2W-sekwinsje) tige ferlykber binne mei dy fan minsklike vertebrale sellen, en de MRI-skaaimerken ek befêstigje de observaasjes fan histology en bruto anatomy, dat is, de feroaringen yn 'e vertebral lichem sellen binne progressive. Hoewol de inflammatoire reaksje feroarsake troch acute trauma kin ferskine gau nei puncture, MRI-resultaten lieten sjen dat stadichoan tanimmende sinjaalferoarings ferskynden 12 wiken nei puncture en oanhâlde oant 20 wiken sûnder tekenen fan herstel of omkearing fan MRI-wizigingen. Dizze resultaten suggerearje dat autologe vertebral NP in betroubere metoade is foar it fêststellen fan progressive MV yn kanizen.
Dit puncture-model fereasket adekwate feardigens, tiid en sjirurgyske ynspanning. Yn foarriedige eksperiminten, dissection of oermjittige stimulearring fan de paravertebral ligamentous struktueren kin resultearje yn de formaasje fan vertebral osteophytes. Soarch moat wurde nommen om de neistlizzende discs net te beskeadigjen of te irritearjen. Sûnt de djipte fan penetraasje moat wurde kontrolearre om konsekwinte en reprodusearjende resultaten te krijen, hawwe wy in stekker mei de hân makke troch de skie fan in 3 mm lange naald ôf te snijen. It brûken fan dizze plug soarget foar unifoarme boardjipte yn it vertebrale lichem. Yn foarriedige eksperiminten fûnen trije ortopedyske sjirurgen belutsen by de operaasje 16-gauge needles makliker te wurkjen mei dan 18-gauge needles of oare metoaden. Om oermjittich bloeden by it boarjen foar te kommen, sil it in skoft stilhâlde fan de naald in gaadliker ynbringgat leverje, wat suggerearret dat in bepaalde graad fan MC op dizze manier kontrolearre wurde kin.
Hoewol in protte stúdzjes hawwe rjochte op MC, is net folle bekend oer de etiology en patogenese fan MC25,26,27. Op grûn fan ús eardere stúdzjes fûnen wy dat autoimmuniteit in wichtige rol spilet yn it foarkommen en ûntwikkeling fan MC12. Dizze stúdzje ûndersocht de kwantitative ekspresje fan IL-4, IL-17, en IFN-γ, dy't de wichtichste differinsjaasjepaden binne fan CD4+-sellen nei antigenstimulaasje. Yn ús stúdzje, yn ferliking mei de negative groep, hie de NPE-groep hegere ekspresje fan IL-4, IL-17, en IFN-γ, en de proteinnivo's fan IL-4 en IL-17 wiene ek heger.
Klinysk wurdt IL-17 mRNA-ekspresje ferhege yn NP-sellen fan pasjinten mei disc herniation28. Ferheegde IL-4- en IFN-γ-ekspresjenivo's waarden ek fûn yn in acute net-kompresjeare disc herniation model yn ferliking mei sûne kontrôles29. IL-17 spilet in wichtige rol yn ûntstekking, weefselferwûning yn autoimmune sykten30 en fersterket de ymmúnreaksje op IFN-γ31. Ferbettere IL-17-bemiddele tissue-ferwûning is rapportearre yn MRL / lpr-mûzen32 en autoimmuniteit-fetbere mûzen33. IL-4 kin de ekspresje fan pro-inflammatoire cytokines (lykas IL-1β en TNFα) en makrofage-aktivearring34 remme. It waard rapportearre dat de mRNA-ekspresje fan IL-4 oars wie yn 'e NPE-groep yn ferliking mei IL-17 en IFN-γ op itselde tiidpunt; De mRNA-ekspresje fan IFN-γ yn 'e NPE-groep wie signifikant heger as dy yn' e oare groepen. Dêrom kin IFN-γ-produksje in mediator wêze fan 'e inflammatoare reaksje dy't feroarsake wurdt troch NP-ynterkalaasje. Stúdzjes hawwe sjen litten dat IFN-γ wurdt produsearre troch meardere sel soarten, ynklusyf aktivearre type 1 helper T-sellen, natuerlike killer sellen, en macrophages35,36, en is in kaai pro-inflammatoire cytokine dat befoarderet ymmúnsteurnissen reaksjes37.
Dizze stúdzje suggerearret dat autoimmune antwurd kin wurde belutsen by it foarkommen en ûntwikkeling fan MC. Luoma et al. fûn dat de sinjaal skaaimerken fan MC en promininte NP binne ferlykber op MRI, en beide litte hege sinjaal yn T2W sequence38. Guon cytokines binne befêstige dat se nau ferbûn binne mei it foarkommen fan MC, lykas IL-139. Ma et al. suggerearre dat de omheech of nei ûnderen protrusion fan NP kin hawwe in grutte ynfloed op it foarkommen en ûntwikkeling fan MC12. Bobechko40 en Herzbein et al.41 rapportearren dat NP in immunotolerant weefsel is dat net fan berte de vaskulêre sirkulaasje yn kin. NP-protrusions yntrodusearje frjemde lichems yn 'e bloedfoarsjenning, wêrtroch't lokale autoimmune reaksjes bemiddelje42. Autoimmune reaksjes kinne in grut oantal ymmúnfaktoaren inducearje, en as dizze faktoaren kontinu bleatsteld wurde oan weefsels, kinne se feroaringen yn sinjalearring feroarsaakje43. Yn dizze stúdzje binne oerekspresje fan IL-4, IL-17 en IFN-γ typyske ymmúnfaktoaren, dy't de nauwe relaasje tusken NP en MCs44 fierder bewize. Dit bist model goed mimics de NP trochbraak en yngong yn de ein plaat. Dit proses iepenbiere fierder de ynfloed fan autoimmuniteit op MC.
As ferwachte biedt dit diermodel ús in mooglik platfoarm om MC te studearjen. Dit model hat lykwols noch wat beheiningen: as earste, yn 'e bisteobservaasjefaze, moatte guon konijnen yn' e tuskenfase euthanisearre wurde foar histologyske en molekulêre biologyske testen, sadat guon bisten yn 'e rin fan' e tiid "út gebrûk falle". Twads, hoewol trije tiidpunten yn dizze stúdzje ynsteld binne, hawwe wy spitigernôch mar ien type MC modeleare (Modic type I feroaring), dus it is net genôch om it proses fan minsklike sykteûntwikkeling te fertsjintwurdigjen, en mear tiidpunten moatte wurde ynsteld op better observearje alle sinjaal feroarings. Tredde kinne de feroaringen yn weefselstruktuer yndie dúdlik wurde toand troch histologyske kleuring, mar guon spesjalisearre techniken kinne de mikrostrukturele feroaringen yn dit model better iepenbierje. Bygelyks, polarisearre ljochtmikroskopie waard brûkt om de formaasje fan fibrocartilage te analysearjen yn intervertebrale discs fan knyn45. De lange-termyn effekten fan NP op MC en endplate fereaskje fierdere stúdzje.
Fjouwerenfyftich manlike Nij-Seelânske wite konijnen (gewicht sa'n 2,5-3 kg, leeftyd 3-3,5 moannen) waarden willekeurich ferdield yn sham operaasje groep, spieren ymplantaasje groep (ME groep) en nerve woartel ymplantaasje groep (NPE groep). Alle eksperimintele prosedueres waarden goedkard troch it Ethics Committee fan Tianjin Sikehûs, en de eksperimintele metoaden waarden útfierd yn strikt oerienstimming mei de goedkarde rjochtlinen.
Guon ferbetteringen binne makke oan 'e sjirurgyske technyk fan S. Sobajima 46. Elke knyn waard pleatst yn in laterale recumbency posysje en it anterior oerflak fan fiif opfolgjende lumbar intervertebral discs (IVDs) waard bleatsteld mei help fan in posterolateral retroperitoneal oanpak. Elk knyn krige algemiene anaesthesia (20% urethane, 5 ml / kg fia de earen). In longitudinale hûdincision waard makke fan 'e legere râne fan' e ribben nei de bekkenrâne, 2 sm ventral nei de paravertebrale spieren. De rjochter anterolaterale rôlje fan L1 oant L6 waard bleatsteld troch skerpe en stompe disseksje fan it oerlizzende subkutane weefsel, retroperitoneale weefsel en spieren (Fig. 6A). It disc-nivo waard bepaald mei de bekkenrâne as in anatomysk oriïntaasjepunt foar it L5-L6-skiifnivo. Brûk in 16-gauge puncture needle om in gat yn 'e buert fan' e einplaat fan 'e L5-wervel te boarjen nei in djipte fan 3 mm (Fig. 6B). Brûk in 5-ml syringe om de autologe nucleus pulposus yn 'e L1-L2 intervertebral disc te aspirearjen (fig. 6C). Fuortsmite de nucleus pulposus of spier neffens de easken fan elke groep. Nei't it boorgat ferdjippe is, wurde absorbable sutures pleatst op 'e djippe fascia, oerflakkige fascia en hûd, soargje derfoar dat it periosteale weefsel fan' e vertebrale lichem net beskeadige wurdt by operaasje.
(A) De L5-L6 disc wurdt bleatsteld fia in posterolaterale retroperitoneale oanpak. (B) Brûk in 16-gauge needle om in gat te boarjen by de L5-einplaat. (C) Autologe MF's wurde rispe.
Algemiene anaesthesia waard administrearre mei 20% urethane (5 ml / kg) administraasje fia de earen, en lumbale spine-radiografyen waarden werhelle op 12, 16 en 20 wiken postoperatively.
Konijnen waarden opoffere troch intramuskulêre ynjeksje fan ketamine (25.0 mg / kg) en yntravenous natrium pentobarbital (1.2 g / kg) op 12, 16 en 20 wiken nei operaasje. De hiele rêchbonke waard fuortsmiten foar histologyske analyze en echte analyze waard útfierd. Kwantitative reverse transkripsje (RT-qPCR) en Western blotting waarden brûkt om feroaringen yn ymmúnfaktoaren te detektearjen.
MRI-ûndersiken waarden útfierd yn konijnen mei in 3.0 T klinyske magneet (GE Medical Systems, Florence, SC) foarsjoen fan in ortogonale limb coil ûntfanger. Konijnen waarden anesthetized mei 20% urethane (5 mL / kg) fia de earen en dan pleatst binnen de magneet mei de lumbale regio sintraal op in 5-inch diameter sirkulêre oerflak coil (GE Medical Systems). Coronal T2-gewogen lokalisatorôfbyldings (TR, 1445 ms; TE, 37 ms) waarden oankocht om de lokaasje fan 'e lumbale disc fan L3-L4 nei L5-L6 te definiearjen. Sagittal fleanmasine T2-gewichtige plakjes waarden oankocht mei de folgjende ynstellings: snelle spin-echo-sekwinsje mei in werhellingstiid (TR) fan 2200 ms en in echo-tiid (TE) fan 70 ms, matrix; fisuele fjild fan 260 en acht stimuli; De snijdikte wie 2 mm, de gat wie 0,2 mm.
Nei't de lêste foto waard nommen en it lêste knyn waard fermoarde, waarden de sham, muscle-ynbêde en NP-discs fuortsmiten foar histologysk ûndersyk. Tissues waarden fêst yn 10% neutraal buffered formaline foar 1 wike, decalcified mei ethylenediaminetetraacetic acid, en paraffine seksje. Tissueblokken waarden ynbêde yn paraffine en snijden yn sagittale seksjes (5 μm dik) mei in mikrotoom. Seksjes waarden kleurd mei hematoxylin en eosin (H&E).
Nei it sammeljen fan de intervertebrale discs fan 'e kanizen yn elke groep, waard totaal RNA ekstrahearre mei in UNIQ-10 kolom (Shanghai Sangon Biotechnology Co., Ltd., Sina) neffens de ynstruksjes fan de fabrikant en in ImProm II reverse transcription systeem (Promega Inc. , Madison, WI, Feriene Steaten). Reverse transkripsje waard útfierd.
RT-qPCR waard útfierd mei in Prism 7300 (Applied Biosystems Inc., Feriene Steaten) en SYBR Green Jump Start Taq ReadyMix (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, Feriene Steaten) neffens de fabrikant syn ynstruksjes. It PCR-reaksjevolumint wie 20 μl en befette 1.5 μl fan verdunde cDNA en 0.2 μM fan elke primer. Primers waarden ûntwurpen troch OligoPerfect Designer (Invitrogen, Valencia, CA) en makke troch Nanjing Golden Stewart Biotechnology Co., Ltd. (Sina) (Tabel 1). De folgjende termyske fytsbetingsten waarden brûkt: inisjele polymerase aktivearring stap by 94 ° C foar 2 min, dan 40 cycles fan 15 s elk op 94 ° C foar template denaturation, annealing foar 1 min by 60 ° C, útwreiding, en fluorescence. mjittingen waarden útfierd foar 1 min by 72 ° C. Alle samples waarden trije kear fersterke en de gemiddelde wearde waard brûkt foar RT-qPCR-analyze. Amplifikaasjegegevens waarden analysearre mei FlexStation 3 (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA). IL-4, IL-17, en IFN-γ gene ekspresje waarden normalisearre nei de endogene kontrôle (ACTB). Relative ekspresjenivo's fan doel mRNA waarden berekkene mei de 2-ΔΔCT metoade.
Totaal proteïne waard ekstrahearre út weefsels mei in weefselhomogenisator yn RIPA-lysisbuffer (befette in protease- en fosfatase-ynhibitorcocktail) en dan sintrifuge by 13,000 rpm foar 20 min by 4 ° C om tissue-ôffal te ferwiderjen. Fyftich mikrogram proteïne waarden per baan laden, skieden troch 10% SDS-PAGE, en dan oerbrocht nei in PVDF-membraan. Blokkearje waard útfierd yn 5% nonfat droege molke yn Tris-bufferde saline (TBS) mei 0.1% Tween 20 foar 1 h by keamertemperatuer. De membraan waard ynkubearre mei konijn anty-decorin primêr antykodym (fertinne 1: 200; Boster, Wuhan, Sina) (fertinne 1: 200; Bioss, Peking, Sina) oernacht by 4 ° C en reagearre op 'e twadde dagen; mei sekundêr antykodym (goat anty-konyn immunoglobulin G by 1:40.000 verdunning) kombinearre mei mierikswortel peroxidase (Boster, Wuhan, Sina) foar 1 oere by keamertemperatuer. Western blot-sinjalen waarden ûntdutsen troch ferhege chemiluminescence op 'e chemiluminescent membraan nei X-ray-bestraling. Foar densitometric analyse waarden blots skansearre en kwantifisearre mei BandScan-software en de resultaten waarden útdrukt as de ferhâlding fan doelgen-immunoreaktiviteit nei tubulin-immunoreaktiviteit.
Statistyske berekkeningen waarden útfierd mei it SPSS16.0-softwarepakket (SPSS, FS). Gegevens sammele tidens de stúdzje waarden útdrukt as gemiddelde ± standertdeviaasje (gemiddelde ± SD) en analysearre mei ien-wei werhelle maatregels analyze fan fariânsje (ANOVA) om ferskillen tusken de twa groepen te bepalen. P <0.05 waard beskôge as statistysk signifikant.
Sa kin de oprjochting fan in diermodel fan MC troch it ymplantearjen fan autologe NP's yn it vertebrale lichem en it útfieren fan makroanatomyske observaasje, MRI-analyze, histologyske evaluaasje en molekulêre biologyske analyze in wichtich ark wurde foar it beoardieljen en begripen fan 'e meganismen fan minsklike MC en it ûntwikkeljen fan nije therapeutyske yntervinsjes.
Hoe sitearje dit artikel: Han, C. et al. In diermodel fan Modic-wizigingen waard fêststeld troch it ymplantearjen fan autologe nucleus pulposus yn 'e subchondrale bonke fan' e lumbale rêch. Sci. Rep.. 6, 35102: 10.1038/srep35102 (2016).
Weishaupt, D., Zanetti, M., Hodler, J., and Boos, N. Magnetyske resonânsje-ôfbylding fan 'e lumbale rêch: prevalens fan disc herniation en retinsje, nervewurkkompresje, einplaat-abnormaliteiten, en facetgewrichtsartrose yn asymptomatyske frijwilligers . taryf. Radiology 209, 661-666, doi:10.1148/radiology.209.3.9844656 (1998).
Kjaer, P., Korsholm, L., Bendix, T., Sorensen, JS, en Leboeuf-Eed, K. Modic feroarings en har relaasje mei klinyske befiningen. European Spine Journal: offisjele publikaasje fan 'e European Spine Society, de European Society of Spinal Deformity, en de European Society for Cervical Spine Research 15, 1312-1319, doi: 10.1007/s00586-006-0185-x (2006).
Kuisma, M., et al. Modyske feroaringen yn 'e lumbale vertebrale einplaten: prevalens en assosjaasje mei lege rêchpine en syiatika yn manlike arbeiders fan middelbere leeftyd. Spine 32, 1116–1122, doi:10.1097/01.brs.0000261561.12944.ff (2007).
de Roos, A., Kressel, H., Spritzer, K., and Dalinka, M. MRI fan knoopmerkwizigingen tichtby de einplaat yn degenerative sykte fan 'e lumbale spine. AJR. American Journal of Radiology 149, 531-534, doi: 10.2214/ajr.149.3.531 (1987).
Modic, MT, Steinberg, PM, Ross, JS, Masaryk, TJ, en Carter, JR. Radiology 166, 193-199, doi:10.1148/radiology.166.1.3336678 (1988).
Modic MT, Masaryk TJ, Ross JS, Carter JR Imaging of degenerative disc disease. Radiology 168, 177-186, doi: 10.1148/radiology.168.1.3289089 (1988).
Jensen, TS, et al. Foarsizzers fan neovertebrale endplate (Modic) sinjalearje feroaringen yn 'e algemiene befolking. European Spine Journal: Official Publication of the European Spine Society, the European Society of Spinal Deformity, and the European Society for Cervical Spine Research, Division 19, 129-135, doi: 10.1007/s00586-009-1184-5 (2010).
Albert, HB en Mannisch, K. Modic feroaret nei lumbar disc herniation. European Spine Journal: Offisjele publikaasje fan 'e European Spine Society, de European Society of Spinal Deformity and the European Society for Cervical Spine Research 16, 977-982, doi: 10.1007/s00586-007-0336-8 (2007).
Kerttula, L., Luoma, K., Vehmas, T., Gronblad, M., and Kaapa, E. Modic type I feroarings kinne foarsizze fluch progressive deformational disc degeneraasje: in 1-jier prospective stúdzje. European Spine Journal 21, 1135-1142, doi: 10.1007/s00586-012-2147-9 (2012).
Hu, ZJ, Zhao, FD, Fang, XQ en Fan, SW Modic feroarings: mooglike oarsaken en bydrage oan lumbar disc degeneraasje. Medical Hypotheses 73, 930-932, doi: 10.1016/j.mehy.2009.06.038 (2009).
Krok, HV Ynterne disc rupture. Disc prolapse problemen oer 50 jier. Spine (Phila Pa 1976) 11, 650-653 (1986).
Post tiid: Dec-13-2024