Tige tank foar it besykjen fan natuer.com. De browserferzje dy't jo brûke, hat CSS-stipe beheind. Foar bêste resultaten, riede wy oan om in nijere browser te brûken (of útskeakelje kompatibiliteitsmodus yn Internet Explorer). Yn 'e tuskentiid, om trochgeande stipe te garandearjen, sille wy de side werjaan sûnder stilen en javascript.
De oprjochting fan bistenmodellen fan Modic Change (MC) is in wichtige basis foar it studearjen fan MC. Fjirfy-fjouwer-seelen Nij-Seelânske wite konijnen waarden ferdield yn Sham-Operation Group, spierimplantation Group (Me Group) en Nucleus Pulposus Implantation Group (NPE Group). Yn 'e NPE-groep waard de yntervertebrale skiif bleatsteld troch anterolaterale lumbale sjirurgyske oanpak en in naald waard brûkt om it L5 vertebrale lichem by it einplaat te puntsjen. NP waard ekstrakt út 'e L1 / 2 yntervertebral-skiif troch in spuit en ynjitten yn it. In gat boarjen yn it subchondrale bonke. De sjirurgyske prosedueres en boarmetmetoaden yn 'e spier-ymplantaasjegroep en de sham-operaasje-groep wiene itselde as dy yn' e NP-ymplantaasjegroep. Yn 'e my waard in stikspier yn it gat pleatst, wylst hy yn' e sham-operaasjegroep is, waard neat yn it gat pleatst. Nei de operaasje waarden MRI SCanning en Molekulêre biologyske testen útfierd. It sinjaal yn 'e NPE-groep is feroare, mar d'r wie gjin foar de hân lizzende sinjaalferoaring yn' e skam-operaasje-groep en de my groep. Histologyske observaasje die bliken dat abnormale tissue-proliferaasje waard waarnommen op 'e ymplantaasjedy, en de útdrukking fan IL-4, IL-17 en IFN-γ waard ferhege yn' e NPE-groep. Ymplantaasje fan NP yn it subchondrale bonke kin in diermodel fan MC foarmje.
Modic feroaringen (MC) binne lesjes fan 'e vertebrale oventers en neistlizzende bonken, sichtber op magnetyske resonânsje-imaging (MRI). Se binne frij gewoan yn partikulieren mei assosjeare symptomen1. In protte stúdzjes hawwe it belang fan MC beklamme fanwegen har assosjaasje mei lege rêchpine (LBP) 2,3. De Roos et al.4 en Modic Et Al.5 beskreau earst trije ferskillende soarten subchonternal-signale-abnormaliteiten yn 'e vertebrale bonke marrow. Modic Type I feroaret ik wizigingen binne hypointse op t1-gewicht (T1w) sekwinsjes en hyperintense op T2-gewichtige (T2w)-sekwinsjes. Dizze lesion ûntbleatet fissure oplost en neistlizzende vaskulêre granulêre weefsel yn 'e bonken marrow. Modic Type II-feroarings sjen litte High Signal oan sawol T1w en T2w-sekwinsjes. Yn dit soarte fan lesion is opliedende ferneatiging te finen, lykas histologyske fette ferfanging fan 'e oanswettende bonken marrow. Modic Type III-feroaringen sjen litte leech sinjaal yn T1W en T2W-sekwinsjes. Sclerotyske lesjes dy't oerienkomme mei de oventsplaten binne waarnommen6. MC wurdt beskôge as in patologyske sykte fan 'e rêch en wurdt nau ferbûn mei in protte degenerative sykten fan' e rêch7,8,9.
Oerwagende dat de beskikbere gegevens hawwe, hawwe ferskate stúdzjes detaillearre ynsjoch levere yn 'e etiology en patologyske meganismen fan MC. Albert et al. SUGGESTED dat MC kin wurde feroarsake troch disc Herniation8. Hu et al. taskreaun mc oant slimme skiif degeneraasje10. Kroc foarstelde it konsept fan "ynterne skyfbrupert," dy't stelt dat repetitive skyf Trauma kin liede ta microtears yn 'e ôfgrûn. Nei spullenfoarming, endlusde ferneatiging troch de kearn-pulposus (NP) kin in autoimmune-antwurd trigger, dy't fierder liedt ta de ûntwikkeling fan MC11. Ma et al. dielde in ferlykbere werjefte en rapporteare dat NP-induzeare autoimmuniteit in wichtige rol spielet yn 'e PATHOGENESIS fan MC12.
Immoedingsysteem, foaral cd4 + t helper lymfocyten, spielje in krityske rol yn 'e pathogenese fan autoimmuniteit13. De koartlyn ûntdekte dat dizze subset it prosinflammatoire Cytokine produseart, befoarderet Chemokine-útdrukking, en stimuleart T-sellen yn beskeadige organen om IFN-γ14 te produsearjen. TH2-sellen spielje ek in unike rol yn 'e PATHOGENESIS FAN IMMUNE-antwurden. Utering fan Il-4 as represintatyf D1-sel kin liede ta slimme immunopathologyske gefolgen 200.
Hoewol in protte klinyske stúdzjes binne útfierd op Mc16,17,18,19,20,272,22,22,23,24, d'r is noch altyd in gebrek oan geskikte dierlike modellen dy't it mc-proses foarkomt yn minsken foarkomt brûkt om de etiology of nije behannelingen te ûndersiikjen lykas doelbewust terapy. Oant no, mar in pear diermodellen binne rapporteare fan MC om de ûnderlizzende patologyske meganismen te studearjen.
Basearre op 'e auto -immige teory foarsteld troch Albert en Ma, sette dizze stúdzje in ienfâldich en reprodusearber konijn MC-MC-fan Autotransplanting Np by it boarre vertebrale einplaat. Oare doelen moatte de histologyske skaaimerken fan 'e diermodellen observearje en de spesifike meganismen fan NP evaluearje yn' e ûntwikkeling fan MC. Oan dit ein brûke wy techniken lykas Molekulêre biology, MRI, en histologyske stúdzjes om de progression fan MC te bestudearjen.
Twa konijnen stoaren oan bloeden tidens sjirurgy, en fjouwer konijnen ferstoar yn 'e anesthesia tidens MRI. De oerbleaune 48 konijnen oerlibbe en liet gjin gedrach of neurologyske tekens sjen nei operaasje.
MRI ferskynt dat de sinjaalintensiteit fan it ynbêde weefsel yn ferskate gatten oars is. De sinjaalintensiteit fan it L5 Vertebral-lichem yn 'e NPE-groep feroare stadichoan op 12, 16 en 20 wiken nei ynfoege lege sinjaal, en T2W-sekwinse liet mingd sinjaal hawwe lege sinjaal) (Fig. 1c), wylst de MRI-Uterliker fan 'e oare twa groepen fan ynbêde dielen bleaune yn deselde perioade relatyf stabile (fig. 1a, b).
(A) represintative sekwinsjele MrisS fan 'e rabbit lumbar spine om 3 tiidpunten. Gjin sinjaal abnormaliteiten waarden fûn yn 'e ôfbyldings fan' e sham-operaasje groep. (B) De sinjaal-skaaimerken fan it vertebrale lichem yn 'e my Groep binne gelyk oan dy yn' e sham-operaasje groep, en gjin wichtige sinjaalferoaring wurdt op 'e ynbêde side observearre. (C) Yn 'e NPE-groep is it lege sinjaal dúdlik te sjen yn' e T1W-sekwinsje, en it mingde sinjaal en leech sinjaal binne dúdlik te sjen yn 'e T2W-sekwinsje. Fanôf de perioade fan 12 wiken oant de perioade fan 20 wiken, de sporadyske hege sinjalen om 'e lege sinjalen yn' e T2W-sekwinsje ferminderje.
Desidens Bone Hypergasia kin sjoen wurde by de ymplantaasjedy fan it vertebrale lichem yn 'e NPE-groep, en de bonken komt rapper op fergeliking mei de NPE-groep, wurdt gjin wichtige feroaring waarnommen yn it modeleare vertebral lichems; Sham Group and Me Group (Fig. 2C) 2a, B).
(A) it oerflak fan it vertebrale lichem by it ymplante diel is heul glêd, it gat genêzen, en d'r is gjin hyperplasia yn it vertebrale lichem. (B) De foarm fan 'e ymplante side yn' e mygroep is gelyk oan dat yn 'e skamperaasjegroep, en d'r is gjin blykber feroaring yn it uterlik fan' e ymplante-side oer de tiid. (C) Bone hyperplasse barde by de ymplante side yn 'e NPE-groep. De bonken Hyperplasse ferhege rap en sels útwreide troch de yntervertebrale skiif nei it kontralaterale vertebrale lichem.
Histologyske analyse leveret mear detaillearre ynformaasje oer bonkenfoarming. Figuer 3 toant de foto's fan 'e postoperative seksjes dy't mei H & E. Yn 'e sham-operaasje-groep wiene de chondrocytes goed ynrjochte en gjin sel-proliferaasje waard ûntdutsen (fig. 3a). De situaasje yn 'e ME-groep wie gelyk oan dat yn' e sham-operaasje-groep (Fig. 3B). Yn 'e NPE-groep, in grut oantal chondrocytes en proliferaasje fan NP-achtige sellen waarden waarnommen by de ymplantaasjedysje (Fig. 3C);
(A) Trabeculae kin wurde sjoen yn 'e buert fan it einplaat, de chondrocytes binne kreas regele mei unifoarme selgrutte en foarm en gjin proliferaasje (40 kear). (B) de tastân fan 'e ymplantaasjedokroom yn' e fraach is gelyk oan dy fan 'e skamgroep. Trabeculae en Chondrocytes kinne wurde sjoen, mar d'r is gjin foar de hân lizzende proliferaasje by de ymplantaasjedokumint (40 kear). (B) It kin sjoen wurde dat chondrocytes en NP-achtige sellen signifikant proliferearje, en de foarm en grutte fan chondrocytes binne uneven (40 kear).
De útdrukking fan Interleukin 4 (IL-4) MRNA, Interleukin 17 (IL-17) MRNA, en Interferon γ (IFN-γ) MRNA waarden waarnommen yn sawol de NPE en ME-groepen waarnommen. Doe't de útdrukkingsnivo's fan doel fan doelfalen waarden fergelike, de gen-uteringen fan IL-4, IL-17, en IFN-γ waarden signifikant ferloch yn 'e NPE-groep yn fergeliking mei dy fan' e FAM-groep en de skamperaasjegroep (ôfb. 4) (P <0,05). Yn ferliking mei de Sham Operaasje Groep, de útdrukkingnivo's fan IL-4, IL-17, en IFN-γ Yn 'e ME-groep tanommen mar in bytsje tanommen en net stelde gjin statistyske feroaring (P> 0,05).
De Mrna-ekspresje fan IL-4, IL-17 en IFN-γ Yn 'e NPE-groep toande in signifikant hegere trend dan dyjingen yn' e skamperaasjegroep en de my groep (P <0,05).
Yn tsjinstelling hat de útdrukkingnivo's yn 'e ME-groep yn' e ME-groep gjin wichtich ferskil (P> 0,05).
Western Blot-analyse waard útfierd mei kommersjele beskikbere antistoffen tsjin IL-4 en IL-17 om it feroare MRNA-ekspresje-patroan te befestigjen. Lykas werjûn yn sifers 5a, b, B, fergelike mei de my groep en de skamperaasjegroep, de proteïnenivo's fan IL-4 en IL-4 waarden yn 'e NPE-groep signifikant ferhege (P <0,05). Yn ferliking mei de Sham Operation Group, de proteïne-nivo's fan IL-4 en IL-4 en IL-17 yn 'e ME-groep slagge ek gjin statistysk wichtige feroaringen te berikken (P> 0,05).
(A) de proteïne-nivo's fan IL-4 en IL-17 yn 'e NPE-groep wiene signifikant heger dan dy yn' e my groep en placebo-groep (P <0,05). (B) western blot histogram.
Fanwegen it beheinde oantal minsklike samplen krigen tidens operaasje, helder en detaillearre stúdzjes op 'e pathogenesis fan MC binne wat lestich. Wy besochten in diermodel te fêstigjen fan MC om har potensjele patologyske meganismen te studearjen. Tagelyk waard radiologyske evaluaasje, histologyske evaluaasje en molekulêre evaluaasje brûkt om de kursus te folgjen fan 'e kursus fan MC-induzeare troch NP Autograft. As resultaat resultearre it NP-ymplantaasjelemodel yn in stadige feroaring yn in signalinten yn sinjaal tiid (mingde leech sinten yn T1W-signalearje yn T2W-sekwinsjes), en oanjaan fan tissue feroaret, en it histologyske en molekulêr Biologyske evaluaasjes befêstige de resultaten fan 'e radiologyske stúdzje.
De resultaten fan dit eksperimint-toant dat fisuele en histologyske feroaringen barde op 'e side fan vertebrale lichem ynbreuk yn' e NPE-groep. Tagelyk de utering fan IL-4, IL-17 en IFN-± en il-17, IL-17 en IFN-γ waarden waarnommen, oanjout dat de ynbreuk op autologyske kearn pulposus tissue yn it vertebrale lichem kin in searje sinjaal- en morfologyske feroaringen feroarsaakje. It is maklik om te finen dat de sinjaal skaaimerken fan 'e vertebrale lichems (leech sinjaal yn' e T1W-sekwinsje, mingde sinjaal yn 'e T2S-sekwinsje) binne heulendal, en de MRI-skaaimerken ek Befêstigje de observaasjes fan histology en bruto anatomy, dat is, de feroaringen yn 'e vertebrale lichemsellen binne progressyf. Hoewol de inflammatoire antwurd feroarsake troch akute trauma kin ferskine, ferskynden MRI-resultaten dy't progressyf ferheegingen ferheegjen 12 wiken ferskynde oant 20 wiken sûnder tekens fan herstellen of omkeard fan MRI-feroaringen. Dizze resultaten suggerearje dat Autologous Vertebrale NP in betroubere metoade is foar it oprjochtsjen fan progressive MV yn kninen.
Dit puncture-model fereasket adekwate feardigens, tiid, en sjirurgyske ynset. Yn foarriedige eksperiminten, disseksje of oermjittige stimulearring fan 'e paravertebrale strukturen kinne resultearje yn' e foarming fan vertebrale osteophytes. Soarch moat wurde nommen om de oanswettende skiven net te beskeadigjen of te irritearjen. Sûnt de djipte fan penetraasje moat wurde regele om konsekwint en reprodusearbere resultaten te krijen, hawwe wy manuell makke troch de skede fan 'e mûge fan in 3 mm lang needsaak te snijen. Mei help fan dizze plug soarget foar unifoarm boorm djipte yn it vertebrale lichem. Yn foarriedige eksperiminten, trije ortopedyske sjirurgen yn 'e operaasje fûn yn' e operaasje fan 16-gauge naalder te wurkjen om te wurkjen mei dan 18-gauge naalden of oare metoaden. Om oermjittige bloeie te foarkommen tidens it boarjen, hâldt de naald noch in skoft te hâlden, sil in mear geskikte ynfoegje hawwe, suggerearje dat in bepaalde mac op dizze manier kin wurde kontroleare.
Hoewol in protte stúdzjes hawwe rjochte, is net, is net folle bekend oer de etiology en patogenesis fan Mc25,26,27. Basearre op ús foarige stúdzjes fûnen wy dat autoimmuniteit in wichtige rol spielet yn it foarkommen en ûntwikkeling fan MC12. Dizze stúdzje ûndersocht de kwantitative útdrukking fan IL-4, IL-17, en IFN-γ, dy't de wichtichste differinsjaasje-paden fan CD4 +-sellen binne nei Antigen stimulearring. Yn ús stúdzje, fergelike mei de negative groep, hie de NPE-groep hegere útdrukking fan IL-4, IL-17, en IFN-γ, en de Protein-nivo's fan IL-4 en IL-17 wiene ek heger.
Klinically is Il-17 Mrna-ekspresje ferhege yn NP-sellen fan pasjinten mei skiif HerniAt28. Fergrutte Il-4 en IFN-γ-ekspresje-utdrukkingivo's waarden ek te finen yn in akute net-kompresje fan net-compressyf skyfkoeding yn fergeliking mei sûne kontrôles29. Il-17 spilet in wichtige rol yn ûntstekking, tissue-blessuere yn Autoimmune-sykten | en ferbetteret de ymmúnrogning op IFN-Γ3. Ferbettere IL-17-bemaalde tissue-blessuere is rapporteare yn MRL / LPR MICE33 en AutoImunity-gefoelige mice33. Il-4 kin de útdrukking fan prosinflammatoire Cytokines ynhibit (lykas IL-1β en TNFα) en Makrophage-aktivearring34. It waard rapporteare dat de MRNA-útdrukking fan IL-4 oars wie yn 'e NPE-groep fergelike mei Il-17 en IFN-± op itselde punt; De Mrna-ekspresje fan IFN-γ Yn 'e NPE-groep wie signifikant heger dan dat yn' e oare groepen. Dêrom kin IFN-γ-produksje in bemiddel wêze fan 'e inflammatoire reaksje induced troch NP-yntercalation. Stúdzjes hawwe sjen litten dat ifn-γ wurdt produsearre troch meardere seltypen, ynklusyf aktivearre type 1 helper T-sellen, en Makrophages35,36, en is in kaai Pro-inflammatoire Cytokine dy't Immune antwurden ûntbûn.
Dizze stúdzje suggereart dat AutoMune-antwurd kin wêze belutsen by it optreden en ûntwikkeling fan MC. Luoma et al. fûn dat de sinjaal skaaimerken fan MC en promininte NP gelyk binne op MRI, en beide hege sinjaal sjen litte yn T2W Sequence38. Guon cytokines binne befêstige om nau te assosjearjen mei it foarkommen fan MC, lykas IL-139. Ma et al. SUGGESTED dat de opwaartse as nei ûnderen as nei ûnderen of nei ûnderen fan NP in grutte ynfloed hat op it foarkommen en ûntwikkeling fan MC12. Bobechko40 en Herzbein et al.41 rapporteare dat NP in ûngerêft is in ûngerêftige tissue dy't de vasckulêre sirkulaasje net kin ynfiere fan berte. NP-protrusions yntrodusearje bûtenlânske lichems yn 'e bloedfoarsjenning, dêrtroch meditulearret lokale autoimmune-reaksjes42. Autoimmune-reaksjes kinne in grut oantal ymmúnfaktoaren oanlizze, en as dizze faktoaren kontinu wurde bleatsteld oan tissues, kinne se feroaringen feroarsaakje yn sinjaal43. Yn dizze stúdzje, overxpression fan IL-4, IL-4, IL-17 en IFN-± binne typyske ymmúneforten, fierder bewize de nauwe relaasje tusken NP en MCS44. Dit diermodel fynt goed de NP-trochbraak en yngong yn 'e einplaat. Dit proses iepenbiere fierder de ynfloed fan autoimmunity op MC.
Lykas ferwachte, leveret dit bistemodel ús mei in mooglik platfoarm om MC te studearjen. Dit model hat lykwols noch wat beheiningen: earst moatte yn 'e observaasje-observaasje, moatte guon tuskentiidse poadium net wurde euthanisearre foar histologyske en molekulêre biology testen, sadat guon bisten "oer it gebrûk falle. Twad, hoewol trije kear punten binne ynsteld yn dizze stúdzje, helje wy allinich ien soarte MC (MODIC-type dat ik feroaret), dus it is net genôch om de minske-sykteûntwikkeling te fertsjintwurdigjen, en mear tiidpunten moatte wurde ynsteld Better observearje alle sinjaal feroarings. Tredde kin de feroaringen yn tissue kinne yndie dúdlik wurde toand troch histologyske kleuring, mar guon spesjaliseare techniken kinne de mikrostructurele feroaringen better iepenbiere. Bygelyks waard polarisearre ljochte mikroskopy brûkt om de foarming te analysearjen fan Fibrocartilage yn Rabbit Intervertebral-discs45. De lange-termyn effekten fan NP op MC en ôfstjitten fereaskje fierdere stúdzje.
Fjirtich manlike Nij-Seelânske wite konijnen (gewicht oer 2,5-3 kg, leeftyd 3-3,5 moannen) waarden willekeurich ferdield yn Sham Operation Group, Mus Gould) en Nerve) en Nerve) en Nerve) en Nerve-woartel-ymplantaasjegroep (NPE-groep). Alle eksperimentele prosedueres waarden goedkard troch de Etyk-kommisje fan Tianjin Hospital, en de eksperimintele metoaden waarden útfierd yn strikte oerienkommen mei de goedkarring.
Guon ferbetteringen binne makke oan 'e sjirurgyske technyk fan S. SoBajima 46. Elk knyn waard pleatst yn in laterale recodeposysje en it anterior oerflak fan fiif opienfolgjende lumbale-yntervertebrale skyfkes (IVDS) waard bleatsteld mei in posterolaterale retroperitonealeeske oanpak. Elk knyn krige General Anesthesia (20% Urethane, 5 ML / KG fia The Ear ANER). In mûnling longitudinale hûd waard makke fan 'e legere râne fan' e ribben oan 'e bekkenrâne, 2 cm ventral nei de paravertebrale spieren. De rjochter anterolaterale rêch fan L6 nei L6 waard bleatsteld troch skerpe en stompe disseksje fan 'e oerlizzende subkutane weefsel, retropenitoneale weefsel, en spieren (fig. 6a). It disc-nivo wie bepaald mei it bekken-râne as in anatomyske landmark foar it l5-l6-skyfnivo. Brûk in naal 16-gauge Puncepture om in gat te boarjen by it einplaat fan 'e L5 Vertebra nei in djipte fan 3 mm (Fig. 6b). Brûk in 5-ml-spuit om de autologyske kearn pulposus te stribjen yn 'e L1-L2 yntervertebrale skiif (Fig. 6c). Ferwiderje de kearn-pulposus as spier neffens de easken fan elke groep. Neidat it boor gat wurdt ferdjippe, wurde absorbere sutures pleatst op 'e djippe fassen, oerflakkige fassa en hûd, soargje derfoar om it periosteal-weefsel te beskeadigjen fan it vertebrale lichem tidens operaasje.
(A) de l5-l6-skiif wurdt bleatsteld fia in posterolaterale retroperitonealeeske oanpak. (B) Brûk in naald 16-gauge om in gat te boarjen by de l5 ôfgrûn. (C) Autologous MFS wurde rispinge.
Algemiene Anesthesia waard bestjoerd mei 20% Urethane (5 ML / KG) bestjoerd fia de ear Ader, en Rabar-rêch waarden Radiografyen werhelle om 12, 16 en 20 wiken postoperatyf.
Rabbits waarden offere troch intramusculêre ynjeksje fan Ketamine (25,0 mg / kg) en yntraveneuze natrium pentobarbital (1,2 g / kg) op 12, 16 en 20 wiken nei operaasje. De heule spine waard fuorthelle foar histologyske analyse en echte analyse waard útfierd. Kwantitative omkearde transkripsje (RT-QPCR) en Westerske blotting waarden brûkt om feroaringen te detektearjen yn ymmúnfaktoaren.
MRI-eksamens waarden útfierd yn konijnen mei in 3.0 T-klinyske magneet (GE Medyske systemen, Florence, SC) foarsjoen fan in ortogonale ledemoei. Konijnen wiene anaesthetisearre mei 20% urethek (5 ml / kg) fia de ear aver en pleatste doe gewoan yn 'e magneet mei de lumbale regio sintraal op in 5-inch diameter sirkulêre oerflakpool (GE Medyske systemen). Coronal T2-gewichtige lokale-ôfbyldings (tr, 1445 ms; te, 37 ms) waarden oankocht om de lokaasje te definiearjen fan 'e lumbale skiif fan l3-l4 nei l5-l6. Sagittal Plane T2-gewichtige plakken waarden oankocht mei de folgjende ynstellingen: Fast Spin-echo-sekwinsje mei in werhellingstiid (tr) fan 2200 ms en in echo tiid (te) fan 70 ms, matrix; fisueel fjild fan 260 en acht stimuli; De snijdikte wie 2 mm, de gat wie 0,2 mm.
Nei de lêste foto waard nommen en it lêste konijn waard fermoarde, de skamte, spier-ynbêde, en NP-skiven waarden ferwidere foar histologyske ûndersiik. Tissues waarden yn 10% neutrale buffered Formalin foar 1 wike fêstlein, bespakt mei etielenediaminetetracetik soere, en paraffine-seksje. Tissueblokken waarden ynbêde yn Paraffin en snije yn Sagittele seksjes (5 μm dik) mei in mikrotome. Seksjes waarden ljochte mei hematoxylin en eosin (H & E).
Nei it sammeljen fan 'e yntervertebrale skiven fan' e konijnen yn elke groep, waard totale RNA ekstrakt mei in UNIQ-10-koliNgology Co., LTD., Sina) neffens de ynstruksjes en in improk II omkearde transkripsjesysteem (Proma Inc. , Madison, WI, Feriene Steaten). Omkearde transkripsje waard útfierd.
RT-QPCR waard útfierd mei in prisma-7300 (tapaste Biosyksyn Inc., FS en Sybr Green Jump Start Taq ReadyMix (Sigma-Aldrich, MO, USA) neffens de ynstruksjes fan 'e fabrikant. It PCR-reaksje-volume wie 20 μL en befette 1,5 μ fan ferwidere CDNA en 0,2 μM fan elke primer. Primers waarden ûntworpen troch OLGEROPERFECT DESIGNER (INVITOPEREN, Valencia, CA) en produsearre troch Nanjing Golden Stewart Biotechnology Co., Ltd. (Sina) (Tabel 1). De folgjende thermyske fytsomstannichheden waarden brûkt: Initial Polymerase aktivaasjestap by 94 ° C foar 2 min, dan 20 S elk om 194 ° CEADING foar 1 min op 60 ° C, útwreiding, en fluorisjes. Ofmjittingen waarden útfierd foar 1 min by 72 ° C. Alle samples waarden trije kear fersterkens en de gemiddelde wearde waard brûkt foar RT-QPCR-analyse. Amplifikaasje gegevens waarden analysearre mei flexstraasje 3 (Molekulêre apparaten, Sunnyvale, CA, Feriene Steaten). IL-4, IL-17, en IFN-γ Gene-útdrukking waarden normalisearre nei de Endogene kontrôle (Actb). Relative Expressionsnivo's fan Doel Mrna waarden berekkene mei de 2-δδCT-metoade.
Totale proteïne waard ekstrakt út 'e tissue mei in tissue mei in tissue-buffer (befettet in prachtige en Phosphatase-ynhibitor Cocktail foar 20 min om 4 ° C om tissue-pún te ferwiderjen. Fyftich mikrogramen proteïne waarden per baan laden, skieden troch 10% SDS-pagina, en dan oerbrocht nei in PVDF-membraan. Blokkering waard útfierd yn 5% nonfat droege molke yn Tris-buffered Saline (TBS) mei 0,1% Tween 20 foar 1 oere by keamertemperatuer. It membraan waard ynkubeare mei konijn anty-dekorin primêr antilody (hilted 1: 200; bouch, Wuhan, 1: 200; Bios, BOIVS, OVERNIGHT AAN 4 ° C en reageare op 'e twadde dagen; Mei fuortsmite antilody (Goat Anti-rabbit immunoglobulin G at 1: 40.000 verdunning) kombineare mei miersadish peroxidase (boster, Wuhan, Sina) foar 1 oere by keamertemperatuer. Western Blot-sinjalen waarden ûntdutsen troch ferhege Chemiluminescen op 'e Chemiluminescent Membraan nei X-Ray-bestraling. Foar densitometryske analyse waarden blots scommen en kwantifisearre mei bandscan-software en de resultaten waarden útdrukt as de ferhâlding fan doel immunoreaktiviteit foar Tubulin.
Statistyske berekkeningen waarden útfierd mei it SPS16.0-software-pakket (SPSS, USA). Gegevens sammele tidens de stúdzje waarden útdrukt as gemiddelde ± standtordeviaasje (gemiddelde ± SD) en analysearre mei ien-wei werhelle maatregels fan ôfwiking (ANOVA) om ferskillen tusken de twa groepen te bepalen. P <0,05 waard beskôge as statistysk signifikant beskôge.
Sa is de oprjochting fan in diermodel fan MC troch automatysk NP's yn it vertebrale lichem te ymplantearjen en MI-analyze út te fieren kin MO-armogyske analys wurde foar it beoardieljen fan 'e meganismen fan Human MC en ûntwikkelje nije Therapeutysk yntervinsjes.
Hoe kinne jo dit artikel oanhelje: Han, C. et al. In diermodel fan modyske feroaringen waard oprjochte troch ymplante te ymplantearjen fan autologyske kearn pulposus yn it subchondrale bonke fan 'e lumbale rêch. Sci. Rep. 6, 35102: 10.1038 / Srep35102 (2016).
WEISHAUPT, D., Zanetti, M., Hodler, J., en Boos, N. Magnetyske resonânsje fan 'e lumbale-rêch fan' e lumbekoar en behâld, en facet joint osteoarthritis yn asymptomatyske frijwilligers . taryf. Radiology 209, 661-666, DOI: 10.1148 / Radiology.209.3.9844656 (1998).
Kjaer, P., Korstholm, L., Bendix, T., Sorensen, JS, en Leboeuf-EED, K. Modic feroaret en har relaasje ta klinyske fynsten. European Spine Journal: Offisjele publikaasje fan 'e Jeropeeske Spine Society, de Jeropeeske maatskippij fan spinale sifeens, en de Jeropeeske maatskippij foar Cervical Spine Research 15, 13.1007 / S00586-006-0185-X (2006).
Kuisma, M., et al. Modic feroaret yn 'e lumbale vertebrale entplaten: prevalens en feriening mei lege rêch pine en sciatica yn middelbere leeftyd manlike arbeiders. Spine 32, 1116-1122, doi: 10.1097 / 01.Br.000000261561.12944.FF (2007).
De Roos, A., Kressel, H., Spritzer, K., en Dalinka, M. MRI fan Bone Marrow feroaret by it einplaat yn degenerative sykte fan 'e lumbale rêch. AJR. Amerikaanske Journal of Radiology 149, 531-534, doi: 10.2214 / ajr.149.3.531 (1987).
Modic, mt, Steinberg, PM, Ross, JS, Masaryk, TJ, en Carter, Jr Degenerative Disc Desease: Evaluaasje fan vertebrale Marrow feroaret mei MRI. Radiology 166, 193-199, DOI: 10.1148 / Radiology.166.1.1.3336678 (1988).
Modic, Mt, Masaryk, TJ, Ross, JS, en Carter, Jr imaging fan degenerative skyf sykte. Radiology 168, 177-186, DOI: 10.1148 / Radiology.168.1.3289089 (1988).
Jensen, TS, et al. PRESISORS FAN NEOVERTEBRALE UNDPLATE (MODIC) SIGNAL-feroarings yn 'e algemiene befolking. European Spine Journal: Offisjele publikaasje fan 'e Jeropeeske Spine Society, de Jeropeeske maatskippij fan spinale Sakeity, en de Jeropeeske maatskippij foar Cervical Speide Undersyk, Divyzje 19, 129-135, DOI: 10.1007 / S00586-009-1184-5 (2010).
Albert, HB en Mannisch, K. Modic feroaret nei it lumbale disc-herniaasje. European SPINE Journal: Offisjele publikaasje fan 'e Jeropeeske Spine Society, de Jeropeeske maatskippij fan spinale Sakeity en de Jeropeeske maatskippij foar Cervical Speine Research 16, 977-982, DOI: 10.1007 / S00586-007-0336-8 (2007).
Kerttula, L., Luoma, K., Vehrmas, T., Gronblad, M., en Kaapa, E. Modic Soart dat ik wizigingen foarsichtich foarsichtich foarsizze: in 1-jiersfolle stúdzje. Jeropeeske Spine Journal 21, 1135-1142, doi: 10.1007 / S00586-012-2147-9 (2012).
Hu, ZJ, Zhao, FD, Fang, XQ en Fan, SW Modic Wizigingen: Mooglike oarsaken en bydrage oan lumbar disc degeneraasje. Medyske hypotezen 73, 930-932, doi: 10.1016 / J.Mehy.2009.06.038 (2009).
Krok, hv ynterne skiif rop. Skyfproblemen oer problemen oer 50 jier. Spine (Phila Pa 1976) 11, 650-653 (1986).
Posttiid: DEC-13-2024