Tankewol foar jo besite oan Nature.com. De browserferzje dy't jo brûke hat beheinde CSS-stipe. Foar de bêste resultaten advisearje wy in nijere browser te brûken (of de kompatibiliteitsmodus yn Internet Explorer út te skeakeljen). Yn 'e tuskentiid, om trochgeande stipe te garandearjen, sille wy de side sûnder stilen en JavaScript werjaan.
It fêststellen fan diermodellen fan modyske feroaring (MC) is in wichtige basis foar it bestudearjen fan MC. Fjouwerenfyftich Nij-Seelânske wite kninen waarden ferdield yn in sham-operaasjegroep, in spierymplantaasjegroep (ME-groep) en in nucleus pulposus-ymplantaasjegroep (NPE-groep). Yn 'e NPE-groep waard de tuskenwervelskiif bleatlein troch in anterolaterale lumbale sjirurgyske oanpak en waard in nulle brûkt om it L5-wervellichem by de einplaat te puncturearjen. NP waard mei in spuit út 'e L1/2 tuskenwervelskiif helle en deryn ynjektearre. In gat yn it subchondrale bonke waard boarre. De sjirurgyske prosedueres en boarmetoaden yn 'e spierymplantaasjegroep en de sham-operaasjegroep wiene itselde as dy yn 'e NP-ymplantaasjegroep. Yn 'e ME-groep waard in stik spier yn it gat pleatst, wylst yn 'e sham-operaasjegroep neat yn it gat pleatst waard. Nei de operaasje waarden MRI-scannings en molekulêr-biologyske testen útfierd. It sinjaal yn 'e NPE-groep feroare, mar der wie gjin dúdlike sinjaalferoaring yn 'e sham-operaasjegroep en de ME-groep. Histologyske observaasje liet sjen dat abnormale weefselproliferaasje waarnommen waard op it ymplantaasjeplak, en de ekspresje fan IL-4, IL-17 en IFN-γ wie ferhege yn 'e NPE-groep. Ymplantaasje fan NP yn it subchondrale bonke kin in diermodel fan MC foarmje.
Modyske feroarings (MC) binne laesjes fan 'e vertebrale einplaten en oangrinzgjend bonkenmerg dy't sichtber binne op magnetyske resonânsjeôfbylding (MRI). Se komme frij faak foar by persoanen mei assosjearre symptomen1. In protte stúdzjes hawwe it belang fan MC beklamme fanwegen syn assosjaasje mei lege rêchpine (LBP)2,3. de Roos et al.4 en Modic et al.5 hawwe ûnôfhinklik fan elkoar earst trije ferskillende soarten subchondrale sinjaalôfwikingen yn it vertebrale bonkenmerg beskreaun. Modyske type I-feroarings binne hypointens op T1-gewogen (T1W) sekwinsjes en hyperintens op T2-gewogen (T2W) sekwinsjes. Dizze laesje lit fissuer-einplaten en oangrinzgjend vaskulêr granulaasjeweefsel yn it bonkenmerg sjen. Modyske type II-feroarings litte in heech sinjaal sjen op sawol T1W- as T2W-sekwinsjes. Yn dit type laesje kin einplaatferneatiging fûn wurde, lykas histologyske fettige ferfanging fan it oangrinzgjende bonkenmerg. Modyske type III-feroarings litte in leech sinjaal sjen yn T1W- en T2W-sekwinsjes. Sklerotyske laesjes dy't oerienkomme mei de einplaten binne waarnommen6. MC wurdt beskôge as in patologyske sykte fan 'e rêchbonke en is nau ferbûn mei in protte degenerative sykten fan 'e rêchbonke7,8,9.
Mei it each op de beskikbere gegevens hawwe ferskate stúdzjes detaillearre ynsjoch jûn yn 'e etiology en patologyske meganismen fan MC. Albert et al. suggerearren dat MC feroarsake wurde kin troch in diskusherniaasje8. Hu et al. taskreau MC oan slimme diskdegeneraasje10. Kroc stelde it konsept fan "ynterne diskusruptuur" foar, wat stelt dat repetitive disktrauma kin liede ta mikroskuor yn 'e einplaat. Nei spleetfoarming kin ferneatiging fan 'e einplaat troch de nucleus pulposus (NP) in autoimmune reaksje triggerje, wat fierder liedt ta de ûntwikkeling fan MC11. Ma et al. dielden in ferlykbere opfetting en rapportearren dat NP-induzearre autoimmuniteit in wichtige rol spilet yn 'e patogenese fan MC12.
Ymmúnsysteemsellen, benammen CD4+ T-helperlymfocyten, spylje in krityske rol yn 'e patogenese fan auto-immuniteit13. De koartlyn ûntdutsen Th17-subset produseart it pro-inflammatoire cytokine IL-17, befoarderet chemokine-ekspresje en stimulearret T-sellen yn beskeadige organen om IFN-γ14 te produsearjen. Th2-sellen spylje ek in unike rol yn 'e patogenese fan ymmúnreaksjes. Ekspresje fan IL-4 as in represintative Th2-sel kin liede ta swiere immunopatologyske gefolgen15.
Hoewol in protte klinyske stúdzjes útfierd binne oer MC16,17,18,19,20,21,22,23,24, is der noch in gebrek oan geskikte diereksperimentele modellen dy't it MC-proses kinne neidwaan dat faak by minsken foarkomt en kinne brûkt wurde om de etiology of nije behannelingen lykas rjochte terapy te ûndersykjen. Oant no ta binne mar in pear diermodellen fan MC rapportearre om de ûnderlizzende patologyske meganismen te bestudearjen.
Basearre op 'e autoimmune teory foarsteld troch Albert en Ma, hat dizze stúdzje in ienfâldich en reprodusearber MC-model fan kninen fêststeld troch NP autotransplantaasje tichtby de boarre vertebrale einplaat. Oare doelen binne it observearjen fan 'e histologyske skaaimerken fan' e diermodellen en it evaluearjen fan 'e spesifike meganismen fan NP yn' e ûntwikkeling fan MC. Hjirfoar brûke wy techniken lykas molekulêre biology, MRI en histologyske stúdzjes om de foarútgong fan MC te bestudearjen.
Twa kninen stoaren oan bloedferlies tidens de operaasje, en fjouwer kninen stoaren tidens anaesthesia tidens de MRI. De oerbleaune 48 kninen oerlibben en lieten gjin gedrachs- of neurologyske tekens sjen nei de operaasje.
MRI lit sjen dat de sinjaalintensiteit fan it ynbêde weefsel yn ferskate gatten oars is. De sinjaalintensiteit fan it L5-wervellichem yn 'e NPE-groep feroare stadichoan op 12, 16 en 20 wiken nei it ynfoegjen (T1W-sekwinsje liet in leech sinjaal sjen, en T2W-sekwinsje liet in mingd sinjaal plus in leech sinjaal sjen) (Fig. 1C), wylst de MRI-úterlik fan 'e oare twa groepen ynbêde dielen relatyf stabyl bleau yn deselde perioade (Fig. 1A, B).
(A) Represintative sekwinsjele MRI's fan 'e lumbale rêchbonke fan it knyn op 3 tiidpunten. Gjin sinjaalôfwikingen waarden fûn yn 'e ôfbyldings fan' e sham-operaasjegroep. (B) De sinjaalkarakteristiken fan it wervellichem yn 'e ME-groep binne fergelykber mei dy yn' e sham-operaasjegroep, en der wurdt gjin wichtige sinjaalferoaring waarnommen op it ynbêdingsplak oer tiid. (C) Yn 'e NPE-groep is it lege sinjaal dúdlik sichtber yn' e T1W-sekwinsje, en it mingde sinjaal en lege sinjaal binne dúdlik sichtber yn 'e T2W-sekwinsje. Fan 'e perioade fan 12 wiken oant de perioade fan 20 wiken nimme de sporadyske hege sinjalen om 'e lege sinjalen yn' e T2W-sekwinsje ôf.
Dúdlike bonkehyperplasie kin sjoen wurde op 'e ymplantaasjeplak fan it wervellichem yn 'e NPE-groep, en de bonkehyperplasie komt rapper foar fan 12 oant 20 wiken (Fig. 2C) yn ferliking mei de NPE-groep, gjin wichtige feroaring wurdt waarnommen yn 'e modelleare wervellichems; Sham-groep en ME-groep (Fig. 2C) 2A,B).
(A) It oerflak fan it wervellichem by it ymplantearre diel is tige glêd, it gat genêst goed, en der is gjin hyperplasie yn it wervellichem. (B) De foarm fan it ymplantearre plak yn 'e ME-groep is fergelykber mei dy yn 'e sham-operaasjegroep, en der is gjin dúdlike feroaring yn it uterlik fan it ymplantearre plak yn 'e rin fan 'e tiid. (C) Bonhyperplasie kaam foar op it ymplantearre plak yn 'e NPE-groep. De bonhyperplasie naam rap ta en wreide him sels út troch de tuskenwervelskiif nei it kontralaterale wervellichem.
Histologyske analyze jout mear detaillearre ynformaasje oer bonkefoarming. Figuer 3 lit de foto's sjen fan 'e postoperative seksjes dy't kleurd binne mei H&E. Yn 'e groep mei sham-operaasje wiene de chondrocyten goed rangearre en waard gjin selproliferaasje waarnommen (Fig. 3A). De situaasje yn 'e ME-groep wie fergelykber mei dy yn 'e groep mei sham-operaasje (Fig. 3B). Yn 'e NPE-groep waarden lykwols in grut oantal chondrocyten en proliferaasje fan NP-achtige sellen waarnommen op it plak fan ymplantaasje (Fig. 3C);
(A) Trabekulae binne te sjen tichtby de einplaat, de chondrocyten binne kreas rangearre mei in unifoarme selgrutte en foarm en gjin proliferaasje (40 kear). (B) De tastân fan 'e ymplantaasjeplak yn 'e ME-groep is fergelykber mei dy fan 'e skyngroep. Trabekulae en chondrocyten binne te sjen, mar der is gjin dúdlike proliferaasje op it ymplantaasjeplak (40 kear). (B) It is te sjen dat chondrocyten en NP-like sellen signifikant proliferearje, en de foarm en grutte fan chondrocyten binne ûngelikense (40 kear).
De ekspresje fan interleukin 4 (IL-4) mRNA, interleukin 17 (IL-17) mRNA, en interferon γ (IFN-γ) mRNA waarden waarnommen yn sawol de NPE- as de ME-groepen. Doe't de ekspresjenivo's fan doelgenen waarden fergelike, wiene de genekspresjes fan IL-4, IL-17, en IFN-γ signifikant ferhege yn 'e NPE-groep yn ferliking mei dy fan' e ME-groep en de sham-operaasjegroep (Fig. 4) (P < 0.05). Yn ferliking mei de sham-operaasjegroep namen de ekspresjenivo's fan IL-4, IL-17, en IFN-γ yn 'e ME-groep mar in bytsje ta en berikten se gjin statistyske feroaring (P > 0.05).
De mRNA-ekspresje fan IL-4, IL-17 en IFN-γ yn 'e NPE-groep liet in signifikant hegere trend sjen as dy yn 'e sham-operaasjegroep en de ME-groep (P < 0,05).
Yn tsjinstelling, lieten de ekspresjenivo's yn 'e ME-groep gjin signifikant ferskil sjen (P> 0,05).
Western blot-analyze waard útfierd mei kommersjeel beskikbere antistoffen tsjin IL-4 en IL-17 om it feroare mRNA-ekspresjepatroan te befêstigjen. Lykas te sjen is yn figueren 5A, B, wiene de proteïnenivo's fan IL-4 en IL-17 yn 'e NPE-groep signifikant ferhege (P < 0,05) yn ferliking mei de ME-groep en de sham-operaasjegroep. Yn ferliking mei de sham-operaasjegroep berikten de proteïnenivo's fan IL-4 en IL-17 yn 'e ME-groep ek gjin statistysk signifikante feroaringen (P> 0,05).
(A) De proteïnenivo's fan IL-4 en IL-17 yn 'e NPE-groep wiene signifikant heger as dy yn 'e ME-groep en placebogroep (P < 0,05). (B) Western blot histogram.
Fanwegen it beheinde oantal minsklike samples dat tidens sjirurgy krigen is, binne dúdlike en detaillearre stúdzjes oer de patogenese fan MC wat lestich. Wy hawwe besocht in diermodel fan MC op te stellen om de potinsjele patologyske meganismen te bestudearjen. Tagelyk waarden radiologyske evaluaasje, histologyske evaluaasje en molekulêr-biologyske evaluaasje brûkt om it ferrin fan MC te folgjen dat feroarsake waard troch NP-autograft. As gefolch resultearre it NP-ymplantaasjemodel yn in stadige feroaring yn sinjaalintensiteit fan tiidpunten fan 12 wiken oant 20 wiken (mingd leech sinjaal yn T1W-sekwinsjes en leech sinjaal yn T2W-sekwinsjes), wat weefselferoarings oanjout, en de histologyske en molekulêr-biologyske evaluaasjes befêstigen de resultaten fan 'e radiologyske stúdzje.
De resultaten fan dit eksperimint litte sjen dat fisuele en histologyske feroarings foarkamen op it plak fan ynbreuk op it wervellichem yn 'e NPE-groep. Tagelyk waard de ekspresje fan IL-4-, IL-17- en IFN-γ-genen, lykas IL-4, IL-17 en IFN-γ waarnommen, wat oanjout dat de ynbreuk op autolog nucleus pulposus-weefsel yn it wervellichem in searje sinjaal- en morfologyske feroarings kin feroarsaakje. It is maklik te finen dat de sinjaalkarakteristiken fan 'e wervellichems fan it diermodel (leech sinjaal yn 'e T1W-sekwinsje, mingd sinjaal en leech sinjaal yn 'e T2W-sekwinsje) tige ferlykber binne mei dy fan minsklike wervellichemsellen, en de MRI-karakteristiken befêstigje ek de observaasjes fan histology en bruto anatomy, dat wol sizze, de feroarings yn 'e wervellichemsellen binne progresyf. Hoewol de ûntstekkingsreaksje feroarsake troch akút trauma al gau nei de punktuer kin ferskine, lieten MRI-resultaten sjen dat progresyf tanimmende sinjaalferoarings 12 wiken nei de punktuer ferskynden en oant 20 wiken oanhâlden sûnder tekens fan herstel of omkearing fan MRI-feroarings. Dizze resultaten suggerearje dat autologe vertebrale NP in betroubere metoade is foar it fêststellen fan progressive MV by kninen.
Dit punktuermodel fereasket foldwaande feardigens, tiid en sjirurgyske ynspanning. Yn foarriedige eksperiminten kin disseksje of oermjittige stimulearring fan 'e paravertebrale ligamenteuze struktueren resultearje yn 'e foarming fan vertebrale osteofyten. Soarch moat nommen wurde om de oanbuorjende skiven net te beskeadigjen of te irritearjen. Om't de djipte fan penetraasje kontroleare wurde moat om konsekwinte en reprodusearbere resultaten te krijen, hawwe wy mei de hân in plug makke troch de skede fan in 3 mm lange naald ôf te snijen. It brûken fan dizze plug soarget foar in unifoarme boardjipte yn it wervellichem. Yn foarriedige eksperiminten fûnen trije ortopedyske sjirurgen dy't belutsen wiene by de operaasje dat 16-gauge naalden makliker te wurkjen wiene as 18-gauge naalden of oare metoaden. Om oermjittige bloedingen tidens it boarjen te foarkommen, sil it in skoft stilhâlden fan 'e naald in geskikter ynfoegingsgat leverje, wat suggerearret dat in bepaalde mjitte fan MC op dizze manier kontroleare wurde kin.
Hoewol in protte stúdzjes har rjochte hawwe op MC, is der net folle bekend oer de etiology en patogenese fan MC25,26,27. Op basis fan ús eardere stúdzjes hawwe wy fûn dat auto-immuniteit in wichtige rol spilet yn it foarkommen en de ûntwikkeling fan MC12. Dizze stúdzje ûndersocht de kwantitative ekspresje fan IL-4, IL-17 en IFN-γ, dy't de wichtichste differinsjaasjepaden fan CD4+ sellen binne nei antigeenstimulaasje. Yn ús stúdzje hie de NPE-groep, yn ferliking mei de negative groep, in hegere ekspresje fan IL-4, IL-17 en IFN-γ, en de proteïnenivo's fan IL-4 en IL-17 wiene ek heger.
Klinysk is IL-17 mRNA-ekspresje ferhege yn NP-sellen fan pasjinten mei in diskusherniaasje28. Ferhege IL-4- en IFN-γ-ekspresjenivo's waarden ek fûn yn in akút net-kompressyf diskusherniaasjemodel yn ferliking mei sûne kontrôles29. IL-17 spilet in wichtige rol yn ûntstekking, weefselblessuere by autoimmune sykten30 en ferbetteret de ymmúnreaksje op IFN-γ31. Ferhege IL-17-bemiddelde weefselblessuere is rapportearre yn MRL/lpr-mûzen32 en autoimmuniteitsgefoelige mûzen33. IL-4 kin de ekspresje fan pro-inflammatoire cytokines (lykas IL-1β en TNFα) en makrofaagaktivaasje34 remme. Der waard rapportearre dat de mRNA-ekspresje fan IL-4 oars wie yn 'e NPE-groep yn ferliking mei IL-17 en IFN-γ op itselde tiidpunt; De mRNA-ekspresje fan IFN-γ yn 'e NPE-groep wie signifikant heger as dy yn 'e oare groepen. Dêrom kin IFN-γ-produksje in mediator wêze fan 'e ûntstekkingsreaksje feroarsake troch NP-ynterkalaasje. Undersyk hat oantoand dat IFN-γ produsearre wurdt troch meardere seltypen, ynklusyf aktivearre type 1 helper T-sellen, natuerlike killersellen en makrofagen35,36, en in wichtige pro-inflammatoire cytokine is dy't ymmúnreaksjes befoarderet37.
Dizze stúdzje suggerearret dat in autoimmune reaksje mooglik belutsen is by it foarkommen en de ûntwikkeling fan MC. Luoma et al. fûnen dat de sinjaalkarakteristiken fan MC en promininte NP fergelykber binne op MRI, en beide litte in hege sinjaal sjen yn 'e T2W-sekwinsje38. Guon cytokines binne befêstige as nau ferbûn mei it foarkommen fan MC, lykas IL-139. Ma et al. suggerearren dat de opwaartse of nei ûnderen útstekseling fan NP in grutte ynfloed kin hawwe op it foarkommen en de ûntwikkeling fan MC12. Bobechko40 en Herzbein et al.41 rapportearren dat NP in immunotolerant weefsel is dat fan 'e berte ôf net yn 'e fasskulêre sirkulaasje kin komme. NP-útsteksels yntrodusearje frjemde lichems yn 'e bloedfoarsjenning, wêrtroch lokale autoimmune reaksjes42 bemiddelje. Autoimmune reaksjes kinne in grut oantal ymmúnfaktoaren indusearje, en as dizze faktoaren kontinu bleatsteld wurde oan weefsels, kinne se feroaringen yn sinjalearring feroarsaakje43. Yn dizze stúdzje binne oerekspresje fan IL-4, IL-17 en IFN-γ typyske ymmúnfaktoaren, wat fierder de nauwe relaasje tusken NP en MC's44 bewiist. Dit diermodel imitearret de NP-trochbraak en yngong yn 'e einplaat goed. Dit proses liet fierder de ynfloed fan autoimmuniteit op MC sjen.
Lykas ferwachte biedt dit bistmodel ús in mooglik platfoarm om MC te bestudearjen. Dit model hat lykwols noch wat beheiningen: earst moatte tidens de bistobservaasjefaze guon kninen yn it tuskenstadium euthanasearre wurde foar histologyske en molekulêre biologyske testen, sadat guon bisten mei de tiid "bûten gebrûk reitsje". Twadder, hoewol trije tiidpunten yn dizze stúdzje ynsteld binne, hawwe wy spitigernôch mar ien type MC (Modic type I-feroaring) modellearre, dus it is net genôch om it ûntwikkelingsproses fan 'e minsklike sykte te fertsjintwurdigjen, en moatte mear tiidpunten ynsteld wurde om alle sinjaalferoarings better te observearjen. Tredder kinne de feroarings yn weefselstruktuer yndie dúdlik werjûn wurde troch histologyske kleuring, mar guon spesjalisearre techniken kinne de mikrostrukturele feroarings yn dit model better sjen litte. Bygelyks, polarisearre ljochtmikroskopie waard brûkt om de foarming fan fibrokraakbeen yn tuskenwervelskiven fan kninen te analysearjen45. De lange-termyn effekten fan NP op MC en einplaat fereaskje fierder ûndersyk.
Fjouwerenfyftich manlike Nij-Seelânske wite kninen (gewicht sawat 2,5-3 kg, leeftyd 3-3,5 moannen) waarden willekeurich ferdield yn in groep foar sham-operaasjes, in groep foar spierymplantaasje (ME-groep) en in groep foar senuwoartelymplantaasje (NPE-groep). Alle eksperimintele prosedueres waarden goedkard troch de Etyske Kommisje fan it Tianjin Sikehûs, en de eksperimintele metoaden waarden útfierd yn strikte oerienstimming mei de goedkarde rjochtlinen.
Der binne wat ferbetteringen oanbrocht oan 'e sjirurgyske technyk fan S. Sobajima 46. Elk knyn waard yn in laterale lizzende posysje pleatst en it foarste oerflak fan fiif opienfolgjende lumbale yntervertebrale skiven (IVD's) waard bleatlein mei in posterolaterale retroperitoneale oanpak. Elk knyn krige algemiene anaesthesia (20% urethaan, 5 ml/kg fia de earader). In longitudinale hûdynsnijing waard makke fan 'e ûnderste râne fan' e ribben oant de bekkenrâne, 2 sm ventraal fan 'e paravertebrale spieren. De rjochter anterolaterale rêchbonke fan L1 oant L6 waard bleatlein troch skerpe en stompe disseksje fan it oerlizzende subkutane weefsel, retroperitoneale weefsel en spieren (Fig. 6A). It skivenivo waard bepaald mei de bekkenrâne as in anatomysk oriïntaasjepunt foar it L5-L6 skivenivo. Brûk in 16-gauge puncture nulle om in gat te boarjen tichtby de einplaat fan 'e L5-wervel oant in djipte fan 3 mm (Fig. 6B). Brûk in spuit fan 5 ml om de autologe nucleus pulposus yn 'e L1-L2 tuskenwervelskiif op te sûgjen (Fig. 6C). Ferwiderje de nucleus pulposus of spier neffens de easken fan elke groep. Nei't it boargat djipper makke is, wurde absorbeerbere hechtingen pleatst op 'e djippe fascia, oerflakkige fascia en hûd, wêrby't derfoar soarge wurdt dat it periosteale weefsel fan it wervellichem net beskeadige wurdt tidens de operaasje.
(A) De L5-L6-skiif wurdt bleatlein fia in posterolaterale retroperitoneale oanpak. (B) Brûk in 16-gauge-naald om in gat te boarjen tichtby de L5-eindplaat. (C) Autologe MF's wurde rispe.
Algemiene anaesthesia waard tapast mei 20% urethaan (5 ml/kg) tadien fia de earader, en röntgenfoto's fan 'e lumbale rêchbonke waarden werhelle op 12, 16 en 20 wiken nei de operaasje.
Kninen waarden opoffere troch intramuskulêre ynjeksje fan ketamine (25,0 mg/kg) en intraveneuze natriumpentobarbital (1,2 g/kg) op 12, 16 en 20 wiken nei de operaasje. De hiele rêchbonke waard fuorthelle foar histologyske analyze en echte analyze waard útfierd. Kwantitative reverse transkripsje (RT-qPCR) en Western blotting waarden brûkt om feroaringen yn ymmúnfaktoaren te detektearjen.
MRI-ûndersiken waarden útfierd by kninen mei in 3.0 T klinyske magneet (GE Medical Systems, Florence, SC) foarsjoen fan in ortogonale ledemaatspoelûntfanger. De kninen waarden anaesthesisearre mei 20% urethaan (5 mL/kg) fia de earader en doe op 'e rêch pleatst yn 'e magneet mei de lumbale regio sintraal op in sirkelfoarmige oerflakspoel mei in diameter fan 5 inch (GE Medical Systems). Koronale T2-gewichtige lokalisaasjeôfbyldings (TR, 1445 ms; TE, 37 ms) waarden krigen om de lokaasje fan 'e lumbale skiif te definiearjen fan L3-L4 oant L5-L6. Sagittale flak T2-gewichtige plakjes waarden krigen mei de folgjende ynstellings: snelle spin-echo-sekwinsje mei in werhellingstiid (TR) fan 2200 ms en in echotiid (TE) fan 70 ms, matrix; fisueel fjild fan 260 en acht stimuli; De snijdikte wie 2 mm, de gat wie 0,2 mm.
Nei't de lêste foto makke wie en it lêste knyn deasketten wie, waarden de skyn-, spier-ynbêde en NP-skiven fuorthelle foar histologysk ûndersyk. Weefsels waarden 1 wike fêstmakke yn 10% neutraal gebufferde formaline, ûntkalkifisearre mei ethyleendiamintetraazijnzuur en yn seksjes snien mei paraffine. Weefselblokken waarden ynbêde yn paraffine en mei in mikrotoom yn sagittale seksjes snien (5 μm dik). De seksjes waarden kleurd mei hematoxyline en eosine (H&E).
Nei it sammeljen fan 'e tuskenwervelskiven fan 'e kninen yn elke groep, waard totaal RNA ekstrahearre mei in UNIQ-10-kolom (Shanghai Sangon Biotechnology Co., Ltd., Sina) neffens de ynstruksjes fan 'e fabrikant en in ImProm II reverse transkripsjesysteem (Promega Inc., Madison, WI, Feriene Steaten). Reverse transkripsje waard útfierd.
RT-qPCR waard útfierd mei in Prism 7300 (Applied Biosystems Inc., Feriene Steaten) en SYBR Green Jump Start Taq ReadyMix (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, Feriene Steaten) neffens de ynstruksjes fan 'e fabrikant. It PCR-reaksjevolume wie 20 μl en befette 1,5 μl ferdunde cDNA en 0,2 μM fan elke primer. Primers waarden ûntworpen troch OligoPerfect Designer (Invitrogen, Valencia, CA) en produsearre troch Nanjing Golden Stewart Biotechnology Co., Ltd. (Sina) (Tabel 1). De folgjende termyske syklusbetingsten waarden brûkt: earste polymerase-aktivaasjestap by 94 °C foar 2 minuten, dan 40 syklusen fan 15 sekonden elk by 94 °C foar sjabloandenaturaasje, annealing foar 1 minuut by 60 °C, útwreiding en fluoreszinsje. Mjittingen waarden útfierd foar 1 minuut by 72 °C. Alle samples waarden trije kear amplifisearre en de gemiddelde wearde waard brûkt foar RT-qPCR-analyze. Amplifikaasjegegevens waarden analysearre mei FlexStation 3 (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, Feriene Steaten). IL-4, IL-17, en IFN-γ genekspresje waarden normalisearre nei de endogene kontrôle (ACTB). Relative ekspresjenivo's fan doel mRNA waarden berekkene mei de 2-ΔΔCT-metoade.
Totaal proteïne waard út weefsels helle mei in weefselhomogenisator yn RIPA-lysisbuffer (mei in protease- en fosfatase-remmercocktail) en doe sintrifugearre by 13.000 rpm foar 20 minuten by 4 °C om weefselresten te ferwiderjen. Fyftich mikrogram proteïne waarden per baan laden, skieden troch 10% SDS-PAGE, en doe oerdroegen nei in PVDF-membraan. Blokkearjen waard útfierd yn 5% magere droege molke yn Tris-gebufferde sâltwetteroplossing (TBS) mei 0,1% Tween 20 foar 1 oere by keamertemperatuer. It membraan waard oernachtich by 4 °C ynkubearre mei konijn-anti-dekorine primêr antistof (ferdund 1:200; Boster, Wuhan, Sina) (ferdund 1:200; Bioss, Peking, Sina) en op 'e twadde dei reagearre; mei sekundêr antistof (geite-anti-konijn immunoglobuline G by 1:40.000 ferdunning) kombinearre mei mierikswortelperoxidase (Boster, Wuhan, Sina) foar 1 oere by keamertemperatuer. Western blot-sinjalen waarden ûntdutsen troch ferhege chemilumineszinsje op it chemilumineszinsjemembraan nei röntgenbestraling. Foar densitometryske analyze waarden blots scanne en kwantifisearre mei BandScan-software en de resultaten waarden útdrukt as de ferhâlding fan doelgen-immunoreaktiviteit ta tubuline-immunoreaktiviteit.
Statistyske berekkeningen waarden útfierd mei it SPSS16.0 softwarepakket (SPSS, Feriene Steaten). Gegevens dy't sammele waarden tidens de stúdzje waarden útdrukt as gemiddelde ± standertôfwiking (gemiddelde ± SD) en analysearre mei ienwegs werhelle mjittingsanalyse fan fariânsje (ANOVA) om ferskillen tusken de twa groepen te bepalen. P < 0.05 waard beskôge as statistysk signifikant.
Sa kin it oprjochtsjen fan in diermodel fan MC troch it ymplantearjen fan autologe NP's yn it wervellichem en it útfieren fan makroanatomyske observaasje, MRI-analyze, histologyske evaluaasje en molekulêr-biologyske analyze in wichtich ark wurde foar it beoardieljen en begripen fan 'e meganismen fan minsklike MC en it ûntwikkeljen fan nije terapeutyske yntervinsjes.
Hoe dit artikel te sitearjen: Han, C. et al. In diermodel fan Modic-feroarings waard fêststeld troch it ymplantearjen fan autologe nucleus pulposus yn it subchondrale bonke fan 'e lumbale rêchbonke. Sci. Rep. 6, 35102: 10.1038/srep35102 (2016).
Weishaupt, D., Zanetti, M., Hodler, J., en Boos, N. Magnetyske resonânsjeôfbylding fan 'e lumbale rêchbonke: prevalinsje fan diskherniaasje en -retinsje, kompresje fan senuwwoartel, ôfwikingen fan 'e einplaat, en artrose fan it facetgewricht by asymptomatyske frijwilligers. taryf. Radiology 209, 661–666, doi:10.1148/radiology.209.3.9844656 (1998).
Kjaer, P., Korsholm, L., Bendix, T., Sorensen, JS, en Leboeuf-Eed, K. Modic-feroarings en harren relaasje mei klinyske befiningen. European Spine Journal: offisjele publikaasje fan 'e European Spine Society, de European Society of Spinal Deformity, en de European Society for Cervical Spine Research 15, 1312–1319, doi: 10.1007/s00586-006-0185-x (2006).
Kuisma, M., et al. Modyske feroarings yn 'e lumbale wervelkolom-eindplaten: prevalinsje en assosjaasje mei lege rêchpine en ischias by manlike arbeiders fan middelbere leeftyd. Spine 32, 1116–1122, doi:10.1097/01.brs.0000261561.12944.ff (2007).
de Roos, A., Kressel, H., Spritzer, K., en Dalinka, M. MRI fan feroarings yn it bonkenmerg tichtby de einplaat by degenerative sykte fan 'e lumbale rêchbonke. AJR. American Journal of Radiology 149, 531–534, doi: 10.2214/ajr.149.3.531 (1987).
Modic, MT, Steinberg, PM, Ross, JS, Masaryk, TJ, en Carter, JR Degenerative skiifsykte: evaluaasje fan feroarings yn it rêchmerg mei MRI. Radiology 166, 193–199, doi:10.1148/radiology.166.1.3336678 (1988).
Modic, MT, Masaryk, TJ, Ross, JS, en Carter, JR Ofbylding fan degenerative skiifsykte. Radiology 168, 177–186, doi: 10.1148/radiology.168.1.3289089 (1988).
Jensen, TS, et al. Foarspellers fan neovertebrale einplaat (Modic) sinjalearje feroarings yn 'e algemiene befolking. European Spine Journal: Offisjele publikaasje fan 'e European Spine Society, de European Society of Spinal Deformity, en de European Society for Cervical Spine Research, Division 19, 129–135, doi: 10.1007/s00586-009-1184-5 (2010).
Albert, HB en Mannisch, K. Modic-feroarings nei lumbale diskherniaasje. European Spine Journal: Offisjele publikaasje fan 'e European Spine Society, de European Society of Spinal Deformity en de European Society for Cervical Spine Research 16, 977–982, doi: 10.1007/s00586-007-0336-8 (2007).
Kerttula, L., Luoma, K., Vehmas, T., Gronblad, M., en Kaapa, E. Modic type I feroarings kinne rap progressive deformaasjonele diskdegeneraasje foarsizze: in 1-jierrige prospektive stúdzje. European Spine Journal 21, 1135–1142, doi: 10.1007/s00586-012-2147-9 (2012).
Hu, ZJ, Zhao, FD, Fang, XQ en Fan, SW Modic-feroarings: mooglike oarsaken en bydrage oan lumbale skiifdegeneraasje. Medyske Hypotheses 73, 930–932, doi: 10.1016/j.mehy.2009.06.038 (2009).
Krok, HV Ynterne tuskenskiifruptuur. Problemen mei tuskenskiifprolaps oer 50 jier. Spine (Phila Pa 1976) 11, 650–653 (1986).
Pleatsingstiid: 13 desimber 2024